產(chǎn)品名稱(chēng)：InspireSpark MJ5460 基因編輯試劑盒 國(guó)產(chǎn)
產(chǎn)品貨號(hào)：MJ5460
產(chǎn)品規(guī)格：50 rxn（含Solution I 75μL，Solution II 2.5mL）
儲(chǔ)存條件：-80℃（長(zhǎng)期），-20℃（解凍后）

技術(shù)參數(shù)：RNP復(fù)合物自遞送系統(tǒng)，支持2000-4000 bp片段敲入

紅榮微再 MJ5460 基因編輯試劑盒 價(jià)格優(yōu)勢(shì)（Inspire Spark® PrimeRNP Kit）華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎咨詢(xún)

產(chǎn)品概述

Inspire Spark® PrimeRNP Kit 是專(zhuān)為攻克原代細(xì)胞基因編輯瓶頸設(shè)計(jì)的革命性工具。基于自遞送CRISPR/SpCas9系統(tǒng)，無(wú)需電轉(zhuǎn)儀即可在 人原代T細(xì)胞、干細(xì)胞及難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系 中實(shí)現(xiàn)85-90%的敲除（KO）/敲入（KI）效率， 解決傳統(tǒng)方法毒性高、效率低的難題。

核心優(yōu)勢(shì)：三大技術(shù)突破

1. 終結(jié)電轉(zhuǎn)依賴(lài)，解鎖原代細(xì)胞極限
   傳統(tǒng)電轉(zhuǎn)導(dǎo)致原代細(xì)胞死亡率>40%，而 Inspire Spark® 通過(guò) eSpCas9-SgRNA自組裝復(fù)合物（37℃ 5分鐘成核），直接穿透細(xì)胞膜。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：人原代T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)后存活率>95%，編輯效率穩(wěn)定達(dá) 88.2±3.1%（n=15）。

2. 雙高特性：高效率+低脫靶
   對(duì)比野生型Cas9， Solution I中優(yōu)化的eSpCas9蛋白 通過(guò)帶正電荷結(jié)構(gòu)域增強(qiáng)靶向性，脫靶率降低 4.2倍（全基因組測(cè)序驗(yàn)證）。支持多基因同步編輯（≤4基因），KO/KI雙功能效率>85%。

3. AAV輔助大片段敲入標(biāo)準(zhǔn)化
   兼容 AAV donor載體（MOI 2×10?-5×10?），實(shí)現(xiàn)2000-4000 bp定點(diǎn)整合，KI效率 50-80%。案例：TRAC位點(diǎn)CAR構(gòu)建成功率78.3%，遠(yuǎn)超慢病毒方案（<35%）。

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實(shí)驗(yàn)流程（以人原代T細(xì)胞為例）

一、轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物制備

混合1.5μL SgRNA（100μM） + 1.5μL Solution I → 37℃孵育5-10分鐘（形成RNP）。

加50μL Solution II（室溫預(yù)平衡） → 混勻后室溫靜置5分鐘。

二、細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)

細(xì)胞預(yù)處理：激活T細(xì)胞48小時(shí)后洗滌，離心去培養(yǎng)基（用OptiMEM/PBS清洗殘留）。

細(xì)胞沉淀重懸于轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物 → 37℃孵育45分鐘。

三、培養(yǎng)與檢測(cè)

加600μL含10% FBS + 200U IL-2的T細(xì)胞培養(yǎng)基 → 接種至24孔板（密度2-3×10?/mL）。

培養(yǎng)4-5天后檢測(cè)編輯效率。

關(guān)鍵注意事項(xiàng)

應(yīng)用場(chǎng)景 操作要點(diǎn)

AAV輔助KI AAV體積≤5μL：RNP制備階段加入；>5μL：細(xì)胞培養(yǎng)階段加入（MOI: 2×10?-5×10?）

多基因編輯 方案A：混合多靶點(diǎn)RNP；方案B：分步轉(zhuǎn)導(dǎo)（間隔48小時(shí)，≤2基因/次）

細(xì)胞狀態(tài) 轉(zhuǎn)導(dǎo)前活性>90%

電轉(zhuǎn)兼容性 Solution I（eSpCas9）可單獨(dú)用于電轉(zhuǎn) → 效率較野生型提升30%

產(chǎn)品名稱(chēng)：Inspire Spark® PrimeRNP Kit（基因編輯試劑盒）

貨號(hào)：MJ5460

規(guī)格：50 rxn

Inspire Spark PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎咨詢(xún)

紅榮微再 MJ5460 基因編輯試劑盒 價(jià)格優(yōu)勢(shì)（Inspire Spark® PrimeRNP Kit）華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎咨詢(xún)

InspireSpark® PrimeRNP Kit Q&A

Q：T細(xì)胞激活48小時(shí)后離心清洗的清洗液及鋪板培養(yǎng)基要求？

A：清洗液為實(shí)驗(yàn)原用的T細(xì)胞培養(yǎng)基。操作流程：輕柔吹吸重懸細(xì)胞 → 離心（400 ×g, 5

min）→ 徹·底棄上清 → 用新鮮配制的同款T細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。目的：防止T細(xì)胞過(guò)度激

活、去除碎片、優(yōu)化細(xì)胞狀態(tài)。

Q：實(shí)驗(yàn)步驟中FBS能否替換為其他添加劑？

A：可使用人AB血清或無(wú)血清培養(yǎng)基（注：無(wú)血清條件下細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)可能減弱）。

Q：轉(zhuǎn)導(dǎo)培養(yǎng)基含IL-2或血清替代物是否影響轉(zhuǎn)導(dǎo)？

A：無(wú)影響。通過(guò)離心清洗徹·底棄除上清（避免血清蛋白干擾），最終使用轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物重懸

細(xì)胞沉淀即可。

Q：同時(shí)編輯兩個(gè)基因是否需要配置兩份混合液？能否同時(shí)加入細(xì)胞？

A：僅需將RNP1與RNP2加入同一份Solution II中孵育，無(wú)需分裝多份Solution II。混合后的

復(fù)合物可同時(shí)加入細(xì)胞。

Q：敲除（KO）和敲入（KI）能否同時(shí)實(shí)現(xiàn)？最多支持幾個(gè)基因編輯？

A：支持同步操作。多基因編輯需在制備轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物時(shí)進(jìn)行多RNP制備，或分次轉(zhuǎn)導(dǎo)（建議

：首·次轉(zhuǎn)導(dǎo)≤2個(gè)基因，間隔48小時(shí)后再轉(zhuǎn)導(dǎo)≤2個(gè)基因）。

Q：Solution II能否搭配其他廠(chǎng)家的Cas9蛋白？是否支持電轉(zhuǎn)

A：可以使用，但未經(jīng)大量數(shù)據(jù)驗(yàn)證，無(wú)法保證其編輯效率。

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